GMP生产冻存的原代细胞应该如何培养

2023-7-18 21:45| 发布者: 大海的鱼| 查看: 93| 评论: 0

摘要: 　GMP生产原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组 ...

　GMP生产原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞株（系）研究、DNA，RNA和遗传学研究等。
　　一、冻存原代细胞的培养
　　1.将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。
　　2.将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体*融化。
　　3.将冻存管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。
　　4.用70％的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。
　　5.打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹（注意，由于冻存管有负压，开盖时可能会有少量溢出，这是正常现象）。
　　6.用多聚赖氨酸包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。
　　7.盖好培养瓶的盖子，轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。
　　8.将培养瓶放入培养箱中。
　　9.放入培养箱后第6-16小时更换一次培养基，以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。
　　二、原代细胞的组织块培养法：
　　1.组织块接种后的前3天，在观察和移动的过程中，注意不要引起液体的振荡。要避免经常翻动和振动，否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。
　　2.加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。
　　3.当细胞向外迁徙出来后要注意记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长。
　　4.为促进组织块尽快粘贴在培养瓶皿上，可以在种植前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。